核酶的化學(xué)本質(zhì)匯總十篇

序論：好文章的創(chuàng)作是一個(gè)不斷探索和完善的過程，我們?yōu)槟扑]十篇核酶的化學(xué)本質(zhì)范例，希望它們能助您一臂之力，提升您的閱讀品質(zhì)，帶來更深刻的閱讀感受。

篇（1）

反例教學(xué)法是指教師呈現(xiàn)少數(shù)精選的特例，引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行批判的一種教學(xué)方法。因?yàn)榉蠢虒W(xué)法是從教學(xué)實(shí)際中來的，所以此種教學(xué)方法具有真實(shí)、生動(dòng)的特點(diǎn)，能激發(fā)學(xué)生積極的情感，引起學(xué)生內(nèi)心的共鳴，活躍學(xué)生的思維。反例教學(xué)法使用得當(dāng)，一定能收到比正面切入更好的效果。

1. 光合作用一定需要葉綠體嗎？

舉個(gè)簡(jiǎn)單的反例吧，藍(lán)藻是原核生物，并沒有葉綠體這種細(xì)胞器，但它依然能夠憑借體內(nèi)的藻藍(lán)素進(jìn)行光合作用，把太陽能轉(zhuǎn)化為有機(jī)物中穩(wěn)定的化學(xué)能，所以光合作用必須要有光合色素，但并不一定需要葉綠體。

2. 生態(tài)系統(tǒng)中的生產(chǎn)者一定進(jìn)行光合作用嗎？

反例是硝化細(xì)菌只能進(jìn)行化能合成作用。生產(chǎn)者屬于自養(yǎng)生物，因此包括：

①進(jìn)行光合作用的綠色植物；②進(jìn)行化能合成作用的細(xì)菌，如硝化細(xì)菌、硫細(xì)菌等；③進(jìn)行光合作用的細(xì)菌，例如光合細(xì)菌等。

光合作用和化能合成作用都是自養(yǎng)的方式。主要不同點(diǎn)是：直接能源不同，光合作用的直接能源是光能，而硝化作用的直接能源是化學(xué)能，硝化細(xì)菌將氨氣氧化，形成硝酸：

2NH3+3O22HNO2+2H2O 2HNO2+O22HNO3在這兩步反應(yīng)中都釋放出化學(xué)能，將無機(jī)物合成有機(jī)物。

3. 動(dòng)物在生態(tài)系統(tǒng)中的成分一定是消費(fèi)者嗎？

不一定。動(dòng)物絕大多數(shù)是消費(fèi)者，有少部分是分解者，如屎克螂、蚯蚓，甚至大型動(dòng)物如禿鷲等。

4. 進(jìn)行有氧呼吸的生物一定有線粒體嗎？

不一定。好氧細(xì)菌，專性好氧菌，兼性厭氧菌等細(xì)菌只有核糖體而無其它細(xì)胞器，也能進(jìn)行有氧呼吸，原因是含有跟有氧呼吸有關(guān)的酶，它們散布在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)內(nèi)，有的也在細(xì)胞膜內(nèi)膜上。效率是比擁有線粒體的細(xì)胞低的，而線粒體是真核生物主要提供能量的“動(dòng)力車間”。

5. 單細(xì)胞的生物一定是原核生物嗎？

不一定。酵母菌是單細(xì)胞生物，但是真核生物。原生動(dòng)物都是真核生物，但也是單細(xì)胞的生物。例如：草履蟲，變形蟲。

6. 酶的化學(xué)本質(zhì)一定是蛋白質(zhì)嗎？

不一定。酶的化學(xué)本質(zhì)大多數(shù)是蛋白質(zhì)，少部分是RNA。

化學(xué)本質(zhì)是RNA的酶指核酶。核酶是具有催化功能的RNA分子，是生物催化劑。它的發(fā)現(xiàn)打破了酶是蛋白質(zhì)的傳統(tǒng)觀念。核酶與蛋白質(zhì)酶相比，核酶的催化效率較低，是一種較為原始的催化酶。

7. 真核細(xì)胞中的DNA一定分布在細(xì)胞核中嗎？

不一定。DNA主要在細(xì)胞核內(nèi)，線粒體，葉綠體的基質(zhì)也有。

8. 真核細(xì)胞中的RNA一定分布在細(xì)胞質(zhì)中嗎？

不一定。RNA主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，還有少數(shù)在細(xì)胞核和核糖體內(nèi)。

9. 所有的植物在生態(tài)系統(tǒng)中一定是生產(chǎn)者嗎？

不一定。 如： 菟絲子不能進(jìn)行光合作用，只能營(yíng)寄生生活，所以不屬于生產(chǎn)者。

10. 生態(tài)系統(tǒng)中所有的細(xì)菌一定是分解者嗎？

不一定。營(yíng)腐生生活的細(xì)菌是分解者，而硝化細(xì)菌能進(jìn)行化能合成作用，屬于自養(yǎng)生物。在生態(tài)系統(tǒng)中屬于生產(chǎn)者。

篇（2）

首先,大多數(shù)的蛋白酶在高溫下分子結(jié)構(gòu)遭到破壞,并失去了活性,特別是大多數(shù)的蛋白酶,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的變性而失去活性,這種變性大多是不可逆的,而且隨著溫度的升高,這種變性更無恢復(fù)的可能,也就是說曲線的右側(cè)的某一位置上應(yīng)該與橫坐標(biāo)有一個(gè)交點(diǎn),而課本上的插圖沒有。為此筆者完整地摘錄了《生化簡(jiǎn)明教程》插圖如下:

從圖上可以明確看出右側(cè)也沒有交點(diǎn)。對(duì)于蛋白類的酶來說,高溫時(shí)失去活性是肯定的,是不是對(duì)于核酶來說有例外呢?筆者專門請(qǐng)教了南京師范大學(xué)的教授,得到的回答也是肯定的,RNA酶在高溫下也會(huì)失去活性,也就是說即使是核酶也應(yīng)該有一個(gè)交點(diǎn)。

其次,在低溫下,酶的活性也會(huì)受到抑制,由于它的分子結(jié)構(gòu)沒有被破壞,所以在適宜的條件下可以恢復(fù),而在日常生活中也可以利用這一點(diǎn)來保存酶,而從《生物化學(xué)簡(jiǎn)明教程》的上述插圖可以看出,左側(cè)是從原點(diǎn)開始的,也就是說有一個(gè)交點(diǎn)。蛋白質(zhì)類的酶在低溫下一般不會(huì)發(fā)生變性,但活性極低,甚至可以低到難以檢測(cè)的程度,RNA酶在低溫下的活性也可能會(huì)很低,因此,給出這個(gè)交點(diǎn)倒是能夠讓人理解的。但酶在高溫下會(huì)發(fā)生變性,變性以后酶的活性大部分將會(huì)完全喪失,最適作用溫度高溫一側(cè)也必定存在一個(gè)交點(diǎn),不給出這個(gè)交點(diǎn)無法讓人理解。

第三,酶的最適作用溫度不是一個(gè)固定不變的常數(shù),其數(shù)值受到底物、種類、作用等因素的影響而改變,例如,酶的作用時(shí)間長(zhǎng)短不同,所求的最適作用溫度亦不同,作用時(shí)間愈長(zhǎng),最適作用溫度愈低,作用時(shí)間愈短,最適作用溫度則愈高。其實(shí)只有在一定的條件下各種酶才有其一定的最適作用溫度,通常動(dòng)物體內(nèi)酶的最適作用溫度在37-50℃,植物體內(nèi)的酶的最適作用溫度在50-60℃。

第四,和一般化學(xué)反應(yīng)相同,酶的反應(yīng)在一定的溫度范圍0-40℃內(nèi),其速度隨溫度的升高而升高,根據(jù)一般經(jīng)驗(yàn)每升高10℃的反應(yīng)速度增加一倍,高溫下酶易失活,絕大多數(shù)酶在60℃即失去活性,故此,最適作用溫度的右側(cè)下降的幅度應(yīng)該較大,左側(cè)上升的幅度應(yīng)該相對(duì)較慢,曲線的兩側(cè)也應(yīng)該不會(huì)程明顯的對(duì)稱。

綜上所述,酶在一定的條件下有一個(gè)最適溫度,并且在最適溫度兩側(cè)應(yīng)該是不對(duì)稱,左側(cè)和橫坐標(biāo)無限接近,右側(cè)和橫軸在某一位置有一個(gè)交點(diǎn)。所以酶受溫度的影響曲線應(yīng)該大體上是這樣一個(gè)趨勢(shì):

當(dāng)然,蛋白酶和核酶在特性上有一定的差異,曲線也應(yīng)該有所變動(dòng)。

另外,從曲線上無法直接反映出來的是,蛋白質(zhì)的變性作用如不過于劇烈,是一種可逆反應(yīng)。這一點(diǎn)在教學(xué)過程中往往也無法作出解釋。例如,胃蛋白酶加熱至80-90℃時(shí),失去溶解性,也無消化的能力,如將溫度再降低到點(diǎn)37℃則它又可恢復(fù)溶解性與消化蛋白的能力,但隨著變性時(shí)間的增加、條件的加劇,變性程度也加深,如蛋白質(zhì)的結(jié)絮作用和凝固作用就是變性程度深刻化,這樣就達(dá)到不可逆的變性。這些也絕不是一個(gè)圖就可以說明的。當(dāng)然上述是筆者的一孔之見,錯(cuò)誤在所難免,請(qǐng)各位同仁不吝賜教。

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2.《生物化學(xué)簡(jiǎn)明教程》高等教育出版社第三版由羅紀(jì)盛等編著

篇（3）

納米材料表面能量轉(zhuǎn)移（Nanomaterials surface energy transfer，NSET）在分析化學(xué)及生物藥物分析等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，如示蹤DNA或蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象改變，識(shí)別DNA折疊的中間產(chǎn)物，監(jiān)測(cè)DNA與金屬離子的相互作用以及測(cè)定與疾病相關(guān)的重要生物分子＼[1～4＼]。在本質(zhì)上，NSET是偶極偶極相互作用，它與熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Fluorescence resonance energy transfer，F(xiàn)RET）的不同之處在于NSET的能量受體是納米粒子表面，其通過在幾何學(xué)上各向同性的偶極向量分布接受供體的能量。NSET增大了供受體之間的能量轉(zhuǎn)移效率，相比FRET，它具有兩個(gè)重要特點(diǎn)＼[5，6＼]：同一個(gè)納米粒子能猝滅從可見到近紅外發(fā)射波長(zhǎng)的熒光；能量轉(zhuǎn)移效率與距離的關(guān)系從1/R6變成1/R4，使得NSET的有效作用距離（約15 nm）比FRET（9 nm）增大了約2倍＼[6＼]。

鉛污染是一種分布廣泛的重金屬污染，它能導(dǎo)致人體腎臟損傷和智力發(fā)育遲滯＼[7＼]。因此，發(fā)展簡(jiǎn)單靈敏的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)環(huán)境中Pb2+污染的方法意義重大。目前，基于脫氧核酶的鉛離子傳感器由于其高靈敏度和高選擇性被廣泛地用于測(cè)定水中Pb2+ ＼[8～14＼]。例如Lu等利用脫氧核酶建立了一系列比色法＼[10～12＼]和熒光共振能量轉(zhuǎn)移法＼[13＼]用于測(cè)定Pb2+。Pb2+脫氧核酶是由一個(gè)酶及底物鏈構(gòu)成，當(dāng)Pb2+存在時(shí)，脫氧核酶可以催化底物鏈發(fā)生特異性的水解斷裂。這一特性常被用來控制納米粒子聚集和熒光共振能量轉(zhuǎn)移供受體之間的距離。在這些方法中，靈敏度和選擇性都較好，但是由于所用脫氧核酶發(fā)生特異性水解斷裂的過程需要嚴(yán)格的反應(yīng)條件，使得操作過程比較復(fù)雜。

研究發(fā)現(xiàn)，Pb2+由于具有與G四鏈體結(jié)構(gòu)空腔尺寸適合的離子半徑（r =0.129 nm）以及與堿基的強(qiáng)配位作用，能與富含G堿基的寡聚核苷酸鏈形成穩(wěn)定的G四鏈體結(jié)構(gòu)＼[15＼]。近來有研究報(bào)道，凝血酶適配體（Thrombinbinding aptamer，TBA，5′GGT TGG TGT GGT TGG3′） 就可以選擇性地與Pb2+形成G四鏈體＼[16＼]。本研究中在TBA DNA的5′端修飾上熒光染料FAM作為能量供體，利用檸檬酸根穩(wěn)定的球形金納米粒子作為能量受體，通過表面能量轉(zhuǎn)移建立了測(cè)定水溶液中Pb2+的分析方法。在Pb2+誘導(dǎo)下，該DNA鏈從自由纏繞狀態(tài)轉(zhuǎn)變成G四鏈體。由于單鏈DNA和G四鏈體的DNA（或雙鏈DNA）具有不同的靜電特性，對(duì)金納米粒子具有不同的吸附能力＼[17＼]。因此，與Pb2+濃度相關(guān)的DNA折疊過程會(huì)改變金納米粒子與染料分子之間的距離，從而影響兩者之間的能量轉(zhuǎn)移效率，具體體現(xiàn)在染料熒光強(qiáng)度的變化。本方法通過監(jiān)測(cè)體系的熒光強(qiáng)度變化就可以簡(jiǎn)單靈敏地實(shí)現(xiàn)對(duì)Pb2+的定量檢測(cè)。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

Hitachi F2500型熒光分光光度計(jì)（日本日立公司），以485 nm激發(fā)，500～600 nm 之間掃描熒光發(fā)射光譜。Shimadzu UV3600 型紫外可見近紅外分光光度計(jì)（日本島津公司）；PHS3C 型酸度計(jì)（成都世紀(jì)方舟科技開發(fā)公司）； QL901型漩渦混合器（江蘇其林貝爾儀器制造有限公司）； 901型恒溫磁力攪拌器（上海精科實(shí)業(yè)有限公司）。

HAuCl4?4H2O（上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；檸檬酸三鈉（上海化學(xué)試劑公司）；Pb（NO3）2（重慶川東化工試劑公司）；熒光素修飾的單鏈DNA（5′FAMGGT TGG TGT GGT TGG3′，上海生工生物工程技術(shù)與服務(wù)有限公司合成）。將DNA干粉以5000 r/min離心5 min后，加入1 mL新煮沸并冷卻的超純水混勻，4 ℃下保存待用。實(shí)驗(yàn)用水均為超純水（重慶利迪現(xiàn)代水技術(shù)設(shè)備有限公司LD50GE型超純水機(jī)制備，18.2 MΩ cm）。實(shí)驗(yàn)中使用三羥甲基氨基甲烷乙酸（TrisHAc）緩沖溶液控制溶液酸度。試劑均為分析純。

2.2實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1金納米粒子（AuNPs）的合成根據(jù)文獻(xiàn)＼[18＼] 的方法稍作修改合成了檸檬酸根穩(wěn)定的AuNPs。具體步驟為：在100 mL 平底燒瓶中依次加入49 mL 超純水，1 mL 1% HAuCl4，磁力攪拌下加熱至沸騰；劇烈攪拌下迅速加入1 mL 5% 檸檬酸三鈉，溶液的顏色變?yōu)闇\黃色；繼續(xù)磁力攪拌并使溶液保持沸騰，5 min內(nèi)可觀察到溶液的顏色從淺黃色經(jīng)由藍(lán)黑色，最終轉(zhuǎn)變?yōu)轷r紅色；停止加熱，繼續(xù)攪拌直至溶液冷卻至室溫。測(cè)得該溶液的LSPR峰最大吸收波長(zhǎng)在520 nm處。其濃度依照LSPR消光光譜和朗伯

3結(jié)果與討論

3.1NSET傳感法檢測(cè)鉛離子的原理

因而與AuNPs之間具有強(qiáng)烈的親和力，使得TBA很容易被吸附到金納米粒子表面＼[17＼]。通過TBA在金納米粒子表面的吸附，修飾于TBA上的FAM染料分子可以靠近金納米粒子，發(fā)生從FAM到金納米粒子表面的能量轉(zhuǎn)移，使得FAM染料的熒光被猝滅。當(dāng)加入Pb2+后，TBA由于含有9個(gè)G堿基，它們能與Pb2+特異性結(jié)合，使TBA從自由纏繞結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)镚四鏈體。由于G四鏈體中暴露在外的是帶負(fù)電荷的磷酸鹽骨架，它們與帶負(fù)電荷的金納米粒子之間能產(chǎn)生強(qiáng)烈的靜電排斥力＼[17＼]，顯著增加了TBA上攜帶的染料分子與金納米粒子之間的距離，減弱了染料分子與金納米粒子之間的表面能量轉(zhuǎn)移，體系的熒光信號(hào)得到恢復(fù)。在一定范圍內(nèi)，形成四鏈體的程度與Pb2+加入濃度成正比，使得體系的熒光強(qiáng)度也與Pb2+濃度成正比，據(jù)此建立了基于表面能量轉(zhuǎn)移的分析方法用于定量測(cè)定水中的Pb2+的方法。

為了示蹤Pb2+引起的TBA構(gòu)象改變以及與AuNPs之間的表面能量轉(zhuǎn)移，利用普通的熒光分光光度計(jì)分別測(cè)定Pb2+存在與否情況下修飾于TBA鏈上的FAM的熒光強(qiáng)度（圖2）。從圖2可見，在沒有AuNPs和Pb2+存在情況下，F(xiàn)AMTBA在520 nm處展示出很強(qiáng)的熒光發(fā)射（圖2a）；當(dāng)加入AuNPs后，由于AuNPs與FAM之間有效的表面能量轉(zhuǎn)移，F(xiàn)AMTBA的熒光幾乎被完全猝滅（圖2c）。這一現(xiàn)象與文獻(xiàn)＼[21＼]所觀察到的金納米粒子對(duì)熒光團(tuán)有較高猝滅效率是一致的。而當(dāng)Pb2+和AuNPs均被加入體系中時(shí)，由于Pb2+誘導(dǎo)FAMTBA的構(gòu)象發(fā)生改變，使得FAM與AuNPs的距離大大增加，降低了表面能量轉(zhuǎn)移的效率，從而使熒光得到一定程度的恢復(fù)（圖2b），據(jù)此實(shí)現(xiàn)對(duì)Pb2+的檢測(cè)。

3.2其它金屬離子的響應(yīng)3.3線性范圍及實(shí)際應(yīng)用

在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，利用TBA探針基于表面能量轉(zhuǎn)移選擇性測(cè)定Pb2+。在Pb2+濃度為12.5～100 nmol/L范圍內(nèi)，獲得了熒光恢復(fù)效率（F/F0）與Pb2+濃度間的線性關(guān)系，線性回歸方程為y=0.910+0.007c （y為體系的熒光恢復(fù)效率F/F0，c為Pb2+濃度（nmol/L）， R2=0.997，圖4），檢出限（3σ）為10 nmol/L。 依據(jù)美國環(huán)境保護(hù)署（EPA）規(guī)定的飲用水中Pb2+濃度不得高于0.015 mg/L （折合72 nmol/L）的標(biāo)準(zhǔn)＼[13＼]，本方法對(duì)Pb2+的線性響應(yīng)范圍正好可用于監(jiān)測(cè)飲用水中Pb2+的含量。采用標(biāo)準(zhǔn)樣品加入法，對(duì)自來水中Pb2+進(jìn)行定量檢測(cè)。為避免次氯酸鹽的強(qiáng)氧化性對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾，在分析之前，自來水需先煮沸。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，標(biāo)準(zhǔn)加入回收率結(jié)果令人滿意。

4結(jié)論

通過Pb2+誘導(dǎo)FAMTBA形成G四鏈體，并基于FAM與AuNPs之間的表面能量轉(zhuǎn)移，建立了一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏的Pb2+傳感方法。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，其檢測(cè)線性范圍為12.5～100 nmol/L，檢出限（3σ）為10 nmol/L。美國環(huán)境保護(hù)署（EPA）規(guī)定飲用水中Pb2+濃度不得高于0.015 mg/L （折合72 nmol/L），故本方法可用于監(jiān)測(cè)自來水中的Pb2+。

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篇（4）

21世紀(jì)是生物科學(xué)高速發(fā)展的時(shí)代，生命科學(xué)新突破、新進(jìn)展引發(fā)人們對(duì)生命現(xiàn)象的持續(xù)關(guān)注，生物工程技術(shù)的應(yīng)用使人們的生活發(fā)生了很大的變化，同時(shí)給社會(huì)生產(chǎn)帶來了重大革新，這所有的變化都與生物化學(xué)學(xué)科的發(fā)展密切相關(guān)。生物化學(xué)是生物學(xué)各專業(yè)學(xué)生必修的一門專業(yè)基礎(chǔ)課程，學(xué)生對(duì)這門課程的掌握程度直接影響對(duì)其他課程的接受情況，生物化學(xué)被列為很多專業(yè)如生物類、農(nóng)業(yè)類、醫(yī)學(xué)類等的考研或其他專業(yè)考試的科目，所以對(duì)該課程的掌握情況直接關(guān)系到學(xué)生的考研和就業(yè)。以全面培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力和綜合素質(zhì)為目標(biāo)，該課程在教學(xué)隊(duì)伍、教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)條件、教學(xué)方法與手段、教學(xué)網(wǎng)站建設(shè)、實(shí)驗(yàn)教學(xué)、教學(xué)質(zhì)量和水平、科研等方面都取得了長(zhǎng)足進(jìn)展，逐漸形成了自己的特色和優(yōu)勢(shì)。2011年，生物化學(xué)被立項(xiàng)為臨沂大學(xué)校級(jí)精品課程，2012年被立項(xiàng)為山東省省級(jí)精品課程。讓學(xué)生在有限的時(shí)間內(nèi)系統(tǒng)掌握生物化學(xué)知識(shí)和技能是教學(xué)的重要任務(wù)，然而在對(duì)2013級(jí)生物科學(xué)和生物技術(shù)專業(yè)學(xué)生的生物化學(xué)學(xué)習(xí)情況調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)學(xué)生存在講授內(nèi)容不能完全掌握、學(xué)習(xí)興趣不高等問題。在分析原因的過程中發(fā)現(xiàn)在理論和實(shí)驗(yàn)教學(xué)中依舊存在一些問題。為了有效激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)其創(chuàng)新思維和實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Γ瑪M進(jìn)一步深化教學(xué)改革，全面提高教育教學(xué)質(zhì)量，現(xiàn)分析如下。

一、目前本課程所面臨的問題

1.生物化學(xué)教材存在更新速度慢和部分重復(fù)的問題。目前生物化學(xué)課程所用教材門類繁多，但多數(shù)只重視生命的本質(zhì)、生命的基本過程和基本規(guī)律，局限于以傳統(tǒng)的靜態(tài)生化、動(dòng)態(tài)生化、機(jī)能生化為主的內(nèi)容，而對(duì)生物化學(xué)的重大進(jìn)展的重視不夠。生物化學(xué)課程的實(shí)用性很強(qiáng)，新概念、新成就、新技術(shù)層出不窮，這些都沒有體現(xiàn)在教材中，大大落后于學(xué)科的發(fā)展。生物化學(xué)還存在教學(xué)內(nèi)容重復(fù)的問題，如糖、脂和維生素化學(xué)在無機(jī)化學(xué)和有機(jī)化學(xué)等課程中已經(jīng)涉及其中大部分內(nèi)容，而遺傳物質(zhì)和蛋白質(zhì)的生物合成及基因表達(dá)調(diào)控等與分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因工程等課程有部分重復(fù)。

2.生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)所占比例偏低，且驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)所占比例大。據(jù)統(tǒng)計(jì)，國外知名院校多單獨(dú)開設(shè)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)課程，且實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)數(shù)與理論時(shí)數(shù)的比例在1.0以上，本校生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)較少，學(xué)時(shí)比為0.5左右。由于實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)少，且驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)所占比例大，如考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量、酵母RNA分離及組分鑒定等，而綜合性、開放性實(shí)驗(yàn)所占比例小，學(xué)生普遍欠缺創(chuàng)新、設(shè)計(jì)能力，抑制了學(xué)生的主觀能動(dòng)性，束縛其科學(xué)思維能力的發(fā)展，非常不利于實(shí)驗(yàn)?zāi)芰Φ呐囵B(yǎng)。

3.實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法單一。生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)長(zhǎng)期依附于理論教學(xué)而沒有受到應(yīng)有的重視。教學(xué)方法以傳統(tǒng)講授形式為主，很少進(jìn)行問題引導(dǎo)，課堂上以教師為主體，在學(xué)生動(dòng)手實(shí)驗(yàn)前，教師從實(shí)驗(yàn)原理、方法、步驟、注意事項(xiàng)，甚至實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的問題都進(jìn)行詳細(xì)講解，學(xué)生被動(dòng)接受知識(shí)，照搬照做、步步模仿。教師在講授過程中多以單一板書的形式進(jìn)行，多媒體網(wǎng)絡(luò)化教學(xué)手段沒有或很少應(yīng)用，且沒有發(fā)揮出現(xiàn)代化教學(xué)手段的特色。

二、生物化學(xué)理論教學(xué)的優(yōu)化———將生命科學(xué)最新進(jìn)展與現(xiàn)有理論體系有機(jī)融合

為了解決生物化學(xué)教學(xué)內(nèi)容陳舊、與其他學(xué)科存在內(nèi)容重復(fù)的問題，許多學(xué)者提出了相應(yīng)的解決方法。劉堰和肖訓(xùn)焰提出教學(xué)內(nèi)容要與時(shí)俱進(jìn)，具體指出在緒論中增加生物化學(xué)研究工作的現(xiàn)狀與未來、在核酸化學(xué)中增加核酸的序列測(cè)定等內(nèi)容。刪除蛋白質(zhì)化學(xué)中蛋白質(zhì)的分類，維生素和輔酶中維生素的概念。胡曉倩等提出，學(xué)生在掌握生物化學(xué)基本知識(shí)和技能的基礎(chǔ)上，要了解學(xué)科發(fā)展的前沿知識(shí)與高新技術(shù)。謝珍玉和郭偉良具體提出講授內(nèi)容的重點(diǎn)部分，部分章節(jié)分配到其他學(xué)科中進(jìn)行重點(diǎn)講解。生物化學(xué)教學(xué)內(nèi)容的修改不是簡(jiǎn)單的增刪或?qū)⒉糠终鹿?jié)分配到其他學(xué)科中講述，在增刪內(nèi)容的同時(shí)需要解決該課程與其他課程內(nèi)容的自然銜接問題，待添加的生命科學(xué)最新進(jìn)展內(nèi)容要與生物化學(xué)現(xiàn)有知識(shí)體系有機(jī)融合。如在講述基因調(diào)控的章節(jié)中向?qū)W生介紹該研究領(lǐng)域的新熱點(diǎn)———微RNA（microRNAs）。讓學(xué)生了解microRNAs是由非蛋白編碼基因轉(zhuǎn)錄物形成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)前體，由核酶剪切，成熟后形成長(zhǎng)度為20～25nt的小RNA分子；真核生物、原核生物和病毒都可以編碼mi-croRNAs；與教學(xué)內(nèi)容中出現(xiàn)的小分子干擾RNA進(jìn)行對(duì)應(yīng)比較；通過講述microRNAs的調(diào)控機(jī)制、功能、研究技術(shù)與方法、應(yīng)用和前景使學(xué)生了解生命科學(xué)中該領(lǐng)域的最新發(fā)展趨勢(shì)。

三、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革———圍繞國計(jì)民生的熱點(diǎn)問題設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

加大生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中綜合性、開放性實(shí)驗(yàn)的比例，由培養(yǎng)學(xué)生基本實(shí)驗(yàn)技能為“指揮棒”的教學(xué)模式逐漸轉(zhuǎn)變到培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新性思維的模式中來。趙云濤等提出實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目分為基礎(chǔ)性、綜合性、設(shè)計(jì)型和創(chuàng)新型實(shí)驗(yàn)。韓寒冰和劉杰鳳提出加強(qiáng)自主性實(shí)驗(yàn)和研究性實(shí)驗(yàn)教學(xué)、培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新性能力的觀點(diǎn)。在培養(yǎng)創(chuàng)新應(yīng)用型人才為目標(biāo)的培養(yǎng)模式下，開展綜合性、開放性實(shí)驗(yàn)的需求越來越迫切。開設(shè)這類實(shí)驗(yàn)的目的是拉近理論和實(shí)際應(yīng)用的距離，讓學(xué)生了解所學(xué)知識(shí)綜合起來可用來解決實(shí)際問題，從而激發(fā)其創(chuàng)新思維，培養(yǎng)其創(chuàng)新能力。在考慮到理論與實(shí)驗(yàn)課程一致性和對(duì)應(yīng)性的基礎(chǔ)上，圍繞國計(jì)民生的熱點(diǎn)問題設(shè)計(jì)綜合性、開放性實(shí)驗(yàn)作為實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革的切入點(diǎn)，可用以解決教學(xué)中課堂與實(shí)驗(yàn)室、理論與實(shí)踐相脫節(jié)的問題，并能實(shí)現(xiàn)各基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的有機(jī)結(jié)合。如2013年3月份報(bào)道臨沂部分地區(qū)冬小麥出現(xiàn)嚴(yán)重病害，表現(xiàn)為受害小麥葉片發(fā)黃、枯萎、矮化，嚴(yán)重地塊小麥完全枯死，導(dǎo)致這種病害的原因是小麥黃花葉病毒的侵染。據(jù)此設(shè)計(jì)小麥總RNA的提取及小麥黃花葉病毒檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)。提取小麥總RNA方法為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)TRIzol法，通過植物總RNA提取實(shí)驗(yàn)使學(xué)生掌握核酸的基本組成、熟悉移液槍、離心機(jī)、研磨器的使用，讓學(xué)生理解RNA提取對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求很高，原因是RNA酶無處不在，RNA易被RNA酶降解。隨后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄及RT-PCR，以小麥黃花葉病毒的特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增，獲得目的大小的特異性條帶。在實(shí)驗(yàn)的過程中使學(xué)生掌握反轉(zhuǎn)錄、RT-PCR及瓊脂糖凝膠電泳等一系列生物化學(xué)基本操作。通過這類實(shí)踐性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)將原有各自獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)統(tǒng)一到同一實(shí)驗(yàn)材料和同一題目下，實(shí)現(xiàn)各基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的有機(jī)結(jié)合，體現(xiàn)出知識(shí)的系統(tǒng)性和實(shí)驗(yàn)的研究性，同時(shí)同一題目下的各個(gè)小實(shí)驗(yàn)一步緊連一步，增強(qiáng)學(xué)生的研究興趣。

四、生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法的改革———由單一到多元化的教學(xué)方法

近五年來，我校實(shí)驗(yàn)中心引進(jìn)一批具有博士學(xué)位的高學(xué)歷人才作為實(shí)驗(yàn)員，這為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革注入了新的活力。這些實(shí)驗(yàn)員以直接或間接的方式參與生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)，可緩解緊張的教師資源，并且他們知識(shí)豐富、思路開闊、創(chuàng)造能力強(qiáng)、創(chuàng)新欲望高，能大大提高實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量。在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中，實(shí)驗(yàn)員與本科生的年齡差別不大，興趣愛好相近，他們之間交流較容易和順暢，重要的是他們知道學(xué)生最想了解的是什么，能在相對(duì)輕松的環(huán)境中交流實(shí)驗(yàn)心得，討論問題。對(duì)有獨(dú)特想法的學(xué)生，在實(shí)驗(yàn)員及教師的指導(dǎo)下進(jìn)一步深入研究，獲得更多的鍛煉。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法改革的過程中，孔繁華等提出實(shí)驗(yàn)課“3+1”的教學(xué)方法；舒樂新等以啟發(fā)式、歸納式、問題式、討論式等教學(xué)法，讓學(xué)生成為教學(xué)的主體，激發(fā)他們的主動(dòng)性和創(chuàng)造性。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法改革過程中以傳統(tǒng)教學(xué)方法與現(xiàn)代多媒體技術(shù)相結(jié)合的手段，直觀、生動(dòng)地向?qū)W生展示實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，充分調(diào)動(dòng)其積極性。采用啟發(fā)式等的常規(guī)教學(xué)方法，要求學(xué)生在教師的啟發(fā)下獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、實(shí)施與總結(jié)，引導(dǎo)學(xué)生獨(dú)立思考、發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新能力，形成開放式、互動(dòng)式的教學(xué)模式。

五、結(jié)語

教學(xué)改革的目的是要增強(qiáng)學(xué)生素質(zhì)的培養(yǎng)，加強(qiáng)對(duì)學(xué)生獲得知識(shí)、運(yùn)用知識(shí)的能力。通過改革優(yōu)化，調(diào)整理論課程內(nèi)容，使學(xué)習(xí)內(nèi)容具有基礎(chǔ)性、現(xiàn)實(shí)性和現(xiàn)代性。在理論與實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容對(duì)應(yīng)的前提下，以社會(huì)中的熱點(diǎn)問題設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將理論學(xué)習(xí)中的各種基礎(chǔ)問題連貫起來，提高學(xué)生創(chuàng)新能力和實(shí)踐興趣。在精心調(diào)整生物化學(xué)教學(xué)內(nèi)容的過程中，以新穎的實(shí)驗(yàn)教學(xué)方法實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)教學(xué)效果的優(yōu)化。生物化學(xué)內(nèi)容復(fù)雜繁多，通過課程改革，學(xué)生在學(xué)習(xí)中得心應(yīng)手，會(huì)促進(jìn)其對(duì)其他課程的學(xué)習(xí)乃至對(duì)未來都會(huì)充滿信心，這將非常有利于學(xué)生的人生發(fā)展，而這樣的前景激勵(lì)著我們?cè)谏锘瘜W(xué)課程改革的道路上不斷前進(jìn)。

作者:王瑩 王浩 井文倩 郗冬梅 單位:臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 臨沂羅西小學(xué) 臨沂大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院

參考文獻(xiàn)：

篇（5）

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎病毒；DNA定量；溶血；PCR

血清中乙型肝炎病毒DNA水平是判斷乙型肝炎病毒在體內(nèi)是否復(fù)制，患者傳染性高低及選擇治療方案的重要指標(biāo)。目前臨床一般采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)進(jìn)行定量檢測(cè)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)融匯了PCR技術(shù)的高效擴(kuò)增，探針技術(shù)的高特異性，光譜技術(shù)的高敏感性等優(yōu)點(diǎn)，通過直接檢測(cè)PCR過程中熒光信號(hào)的變化以獲得定量的結(jié)果。但此技術(shù)可能與標(biāo)本狀態(tài)密切相關(guān)，如溶血、脂血等。有研究表明Hb及其代謝產(chǎn)物可能與Taq酶相互作用，進(jìn)而抑制Taq酶的活性，使PCR擴(kuò)增效率明顯降低，導(dǎo)致定量測(cè)定結(jié)果偏低［1］。在臨床檢驗(yàn)標(biāo)本中，溶血標(biāo)本較為常見，究竟溶血到何種程度會(huì)對(duì)乙型肝炎病毒DNA定量結(jié)果產(chǎn)生影響？本文將探討不同程度溶血對(duì)乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)的影響。

對(duì)象與方法

1.對(duì)象 我們收集了ALT＞40 U/L、HBsAg陽性、HBeAg陽性、HBcAb陽性的乙型肝炎患者30例，其中男性17例，女性13例，年齡在18～53歲之間。

2.試劑 深圳匹基公司提供的乙型肝炎病毒DNA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20070501）、乙型肝炎病毒DNA陽性標(biāo)準(zhǔn)品。

3.儀器 BECKMAN全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀（型號(hào)：Coulter Ac.Tdiffe）、Lightcycle熒光PCR擴(kuò)增儀(羅氏公司)、高速低溫離心機(jī)（Sigma公司）、干式恒溫器（杭州藍(lán)焰科技有限公司）、低溫冰箱（SANYO公司）。

4. 方法

（1）模擬溶血標(biāo)本的制備：抽取30例乙型肝炎患者血液后，2小時(shí)內(nèi)離心分離血清，這種不含Hb的血清作為無Hb對(duì)照組，然后取每位患者600 μl血清及適量紅細(xì)胞混合，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩４稳諏⒑t細(xì)胞的血清管取出放于室溫解凍，完全解凍后再將該管置于-20℃冷凍，如此反復(fù)凍融兩次，使得RBC完全破裂，釋放出Hb。在Coulter全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀測(cè)定每管紅細(xì)胞裂解后的Hb濃度，再用每位患者的血清稀釋，使得Hb終濃度為4 g/L、8 g/L、16 g/L、32 g/L，這些標(biāo)本即為模擬溶血標(biāo)本。

（2）乙型肝炎病毒DNA模板制備：取待測(cè)樣本及陰、陽性對(duì)照（試劑盒備有）各100 μl，分別加入到0.5 ml的離心管中，再分別加入100 μl DNA提取液1，震蕩混勻，13000 rpm離心10 min；吸棄上清液，再加入25 μl提取液2，震蕩至沉淀完全散開，100℃干浴10 min；冷至室溫后，13000 rpm離心10 min，保留上清液備用。

（3）PCR擴(kuò)增：從試劑盒中取出乙型肝炎病毒DNA擴(kuò)增反應(yīng)液、Taq酶及UNG，室溫融化后按規(guī)定比例混合均勻，根據(jù)試劑盒說明書配置反應(yīng)液，分裝于Roche毛細(xì)擴(kuò)增管中，每次實(shí)驗(yàn)均設(shè)2管陰性對(duì)照，1管強(qiáng)陽性對(duì)照，1管臨界陽性對(duì)照， 4管乙型肝炎病毒陽性工作標(biāo)準(zhǔn)品，其拷貝數(shù)分別為〗5.0×104、5.0×105、5.0×106、5.0×107拷貝/ml，將上述對(duì)照及樣本各加2 μl于加好反應(yīng)液的Roche毛細(xì)管中，短暫離心后上機(jī)擴(kuò)增。對(duì)檢測(cè)結(jié)果高于5.0×107拷貝/ml的標(biāo)本進(jìn)行稀釋后再擴(kuò)增，使其結(jié)果落在試劑盒檢測(cè)線形范圍內(nèi)。

（4）核酸擴(kuò)增與熒光數(shù)據(jù)采集：擴(kuò)增條件設(shè)置為37℃孵育3分鐘； 94℃變性1分鐘；再進(jìn)入40個(gè)循環(huán)，每一個(gè)循環(huán)包括92℃變性5秒，60℃退火及延伸30秒，在60℃時(shí)單點(diǎn)收集熒光信號(hào)；儀器檢測(cè)通道選擇F1通道。

（5）分析條件設(shè)定：選擇F1通道，點(diǎn)擊Quantification進(jìn)入定量分析窗口，設(shè)定Analysis方式為proportional，選定Noise bank項(xiàng)，閾值選定為剛好超過陰性對(duì)照品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)，且Ct值不出現(xiàn)任何數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。

（6）數(shù)據(jù)分析：四個(gè)陽性標(biāo)準(zhǔn)品Ct值均須小于38.0，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合度須小于-0.980，陰陽對(duì)照品擴(kuò)增須符合預(yù)期要求，得出的待測(cè)樣品的拷貝數(shù)才為可信結(jié)果。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 將測(cè)得的乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)轉(zhuǎn)換成常用對(duì)數(shù)，再利用SPSS軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，各含Hb的血清組與無Hb的血清組間差異采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行差異性檢驗(yàn)。

結(jié)果

Hb為4、8、16、及32 g/L的血清組中乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)與無Hb的血清組分別進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，P值均大于0.05，因此每一組含Hb的乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)與不含Hb的血清組均無顯著性差異。見表1。

表1 各組乙型肝炎病毒DNA拷貝數(shù)及統(tǒng)計(jì)量（略）

討論

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)乙肝病毒DNA已在臨床廣泛使用，但在臨床應(yīng)用中，影響的因素也較多，如實(shí)驗(yàn)室條件，操作人員的技術(shù)，臨床標(biāo)本的狀態(tài)等。一些研究認(rèn)為溶血標(biāo)本對(duì)FQPCR技術(shù)檢測(cè)乙肝病毒DNA有影響，但也有研究認(rèn)為這種影響并不顯著［2］。本文通過模擬不同程度溶血標(biāo)本，認(rèn)為溶血達(dá)到32 g/L對(duì)檢測(cè)結(jié)果無顯著影響（P＞0.05）。陳英劍等認(rèn)為溶血至20 g/L時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果無影響，這與本文研究結(jié)論基本一致［3］。

本文將乙型肝炎患者抽血后2小時(shí)內(nèi)分離的血清作無Hb對(duì)照組，然后通過反復(fù)凍融使標(biāo)本溶血，再用乙型肝炎患者自身血清稀釋以獲得不同Hb濃度溶血標(biāo)本，在模擬不同程度溶血標(biāo)本過程中，不添加任何外來物質(zhì)，使檢測(cè)結(jié)果受外在因素影響程度減少到最低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理后，發(fā)現(xiàn)溶血程度控制Hb的濃度在32 g/L以下時(shí)，對(duì)乙型肝炎病毒DNA的檢測(cè)結(jié)果無顯著影響（P＞0.05）。出現(xiàn)此結(jié)果的原因可能有兩個(gè)方面，一是在HBVDNA模板的提取過程中，標(biāo)本中的Hb經(jīng)100℃煮沸10分鐘后已經(jīng)變性沉淀，再經(jīng)離心后，待測(cè)樣本上清液中可能不會(huì)有Hb的存在，僅剩Hb的衍生物［4］。而且隨著提取方法的不斷改進(jìn)，提取液中對(duì)DNA聚合酶的干擾物質(zhì)不斷減少，去除Hb越來越徹底。另一方面FQPCR對(duì)乙肝病毒DNA定量檢測(cè)只是一種半定量方法，并不是對(duì)擴(kuò)增后終產(chǎn)量進(jìn)行完全定量，它是根據(jù)樣本可檢測(cè)的起始擴(kuò)增時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)增曲線得出的半定量結(jié)果。本文收集的30例病人的血清中HBVDNA含量均大于107 拷貝/ml，樣本中HBVDNA含量較高，血清中HBVDNA含量小于107 拷貝/ml時(shí)，檢測(cè)結(jié)果是否有差異，尚需進(jìn)一步研究。且本文只對(duì)溶血程度小于32 g/L時(shí)進(jìn)行探討，溶血大于32 g/L時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，也需進(jìn)一步驗(yàn)證再作結(jié)論。溶血程度達(dá)到32 g/L時(shí)已是肉眼非常清晰可見，臨床溶血樣本的溶血程度大多在32 g/L以下，因此我們認(rèn)為一般的溶血樣本可以接受。但需注意的是，本文只是對(duì)深圳匹基公司試劑進(jìn)行探討，不同廠家，可能因使用不同的提取液及提取方法而出現(xiàn)不同的結(jié)論，有文獻(xiàn)報(bào)道，使用PEG沉淀煮沸法和直接加熱煮沸法提取HBVDNA所得的定量結(jié)果有差異，因此不同提取方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果有一定的影響［5］。一般而言廠家提供試劑時(shí)會(huì)給出較為清晰的影響試劑盒使用的各種因素，有能力的PCR實(shí)驗(yàn)室在試劑使用前，可進(jìn)行此類評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)，制訂合適本實(shí)驗(yàn)室使用標(biāo)本留取標(biāo)準(zhǔn)。隨著衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，人們對(duì)檢驗(yàn)質(zhì)量的的要求越來越高，但檢驗(yàn)質(zhì)量不可避免的受較多因素影響，標(biāo)本質(zhì)量是重要的影響因素之一，如溶血、脂血、餐前、餐后等，對(duì)各項(xiàng)影響因素進(jìn)行量化研究，如溶血、脂血達(dá)到何程度時(shí)則定為不合格樣本，都應(yīng)該有明確的指標(biāo)。本文只對(duì)溶血程度小于32 g/L時(shí)進(jìn)行探討，溶血大于32 g/L時(shí)及血清中HBVDNA含量小于107 拷貝/ml拷貝時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，需進(jìn)一步驗(yàn)證再作結(jié)論。

參考文獻(xiàn)

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篇（6）

藥品專利保護(hù)問題一直是我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的薄弱環(huán)節(jié)。由于法規(guī)體系的不健全以及專利保護(hù)意識(shí)淡薄，使得許多原本我國擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的成果都因此落得“為他人做嫁衣裳”的命運(yùn)。這些教訓(xùn)告訴我們：要實(shí)現(xiàn)制藥大國向制藥強(qiáng)國的轉(zhuǎn)變，我們首先必須努力實(shí)現(xiàn)向藥品知識(shí)產(chǎn)權(quán)強(qiáng)國的轉(zhuǎn)變。因此，作為行政主體的政府和市場(chǎng)主體的企業(yè)都必須增強(qiáng)專利保護(hù)意識(shí)，而其中―個(gè)重要方面，就是要加強(qiáng)對(duì)專利保護(hù)制度的研究，尤其是國外先進(jìn)制度的研究，以取長(zhǎng)補(bǔ)短。美國臨時(shí)專利申請(qǐng)規(guī)定是美國對(duì)其專利保護(hù)制度進(jìn)行創(chuàng)新的典型，對(duì)它進(jìn)行研究具有一定的積極意義。

1　美國的臨時(shí)專利申請(qǐng)規(guī)定

1．1 什么是臨時(shí)專利申請(qǐng)規(guī)定 臨時(shí)專利申請(qǐng)(provisionalpatentapplication，PPA)規(guī)定是美國專利商標(biāo)局于1995年6月9日在美國國內(nèi)率先提出實(shí)施的，是美國在烏拉圭回合談判之后，根據(jù)談判協(xié)議修改其專利法的產(chǎn)物。臨時(shí)專利申請(qǐng)規(guī)定主要涉及美國專利法的兩個(gè)條款，即第111條(b)款和第119條(e)款[1]。美國專利法第111條(b)款指出了與臨時(shí)專利申請(qǐng)相關(guān)的一些條件，即建立申請(qǐng)日需要提供說明書和附圖；維持申請(qǐng)日需要在規(guī)定的時(shí)間期限內(nèi)提交申請(qǐng)費(fèi)和發(fā)明人姓名。第119條(e)款指出臨時(shí)專利申請(qǐng)(下文簡(jiǎn)稱“臨時(shí)專利”)為申請(qǐng)人確立了一個(gè)優(yōu)先權(quán)，其保護(hù)期限是1年，在此期限和保護(hù)范圍內(nèi)，只有該“臨時(shí)專利”的持有人可以提出有關(guān)專利申請(qǐng)。但是，專利申請(qǐng)案以臨時(shí)申請(qǐng)的方式提出后，必須在1年內(nèi)正式向美國專利商標(biāo)局提交轉(zhuǎn)換請(qǐng)求書，將“臨時(shí)專利”轉(zhuǎn)為正規(guī)申請(qǐng)，否則此“臨時(shí)專利”在1年后自動(dòng)失效。正規(guī)申請(qǐng)的內(nèi)容應(yīng)包含臨時(shí)專利申請(qǐng)的內(nèi)容和經(jīng)改寫后的內(nèi)容。

臨時(shí)專利申請(qǐng)規(guī)定所針對(duì)的對(duì)象主要是：已經(jīng)脫離基礎(chǔ)理論階段，具有應(yīng)用前景和潛在商業(yè)價(jià)值，但還不能申請(qǐng)專利的成果。如果一項(xiàng)成果的應(yīng)用前景還不明朗，可以先申請(qǐng)臨時(shí)專利，待進(jìn)一步研究后再申請(qǐng)正式專利。對(duì)于藥品而言，它可以有效地保護(hù)剛剛發(fā)現(xiàn)而尚未完全證明有效的藥物分子或藥靶[2]。

1．2　“臨時(shí)專利”的實(shí)質(zhì)相當(dāng)于“國內(nèi)優(yōu)先權(quán)”

筆者認(rèn)為，臨時(shí)專利不是真正意義上的專利，臨時(shí)專利不能予以審查，也無法授予專利權(quán)。實(shí)質(zhì)上，它僅僅是為申請(qǐng)人在將申請(qǐng)轉(zhuǎn)換為正規(guī)申請(qǐng)之前保留一個(gè)優(yōu)先權(quán)日，相當(dāng)于國內(nèi)優(yōu)先權(quán)，而這種較低成本的申請(qǐng)方式使得美國申請(qǐng)人與外國申請(qǐng)人享有烏拉圭回合談判的同等權(quán)利。

2　美國“臨時(shí)專利申請(qǐng)”規(guī)定與中國的“本國優(yōu)先權(quán)”規(guī)定的比較

臨時(shí)專利申請(qǐng)制度的本質(zhì)相當(dāng)于國內(nèi)優(yōu)先權(quán)。我國1992年修改后的《專利法》中第二十九條第二款對(duì)“本國優(yōu)先權(quán)”作出了規(guī)定：申請(qǐng)人于1992年1月1日以后在中國第一次提出發(fā)明或者實(shí)用新型專利申請(qǐng)(包括藥品和用化學(xué)方法獲得的物質(zhì)的專利申請(qǐng)以及食品、飲料和調(diào)味品的專利申請(qǐng))之日起12個(gè)月內(nèi)，又向?qū)＠志拖嗤黝}提出專利申請(qǐng)的，可以享有優(yōu)先權(quán)。此后，我國于2002年修訂的《專利法實(shí)施細(xì)則》的第三十三條又對(duì)獲得本國優(yōu)先權(quán)的條件作出了具體規(guī)定：沒有要求過外國優(yōu)先權(quán)或者本國優(yōu)先權(quán)，即說明本國優(yōu)先權(quán)應(yīng)是首次使用而且只能適用一次；還未被專利局授予專利；不屬于按照規(guī)定提出的分案申請(qǐng)的。

由此可見，這兩種規(guī)定的相同之處，除了上述獲得本國優(yōu)先權(quán)的條件外，對(duì)有效期的規(guī)定都是12個(gè)月，如果12個(gè)月內(nèi)沒有提出第二次申請(qǐng)，則“臨時(shí)申請(qǐng)”或“在先申請(qǐng)”自動(dòng)失效；此外，本國優(yōu)先權(quán)的客體都被嚴(yán)格限制為發(fā)明和實(shí)用新型。

2．1　“臨時(shí)專利”與“國內(nèi)優(yōu)先權(quán)”的積極意義

2．1．1　避免申請(qǐng)人在未獲得專利權(quán)的同時(shí)遭遇技術(shù)秘密公開

根據(jù)美國專利法的規(guī)定，約有10％的專利申請(qǐng)可以作為特例在專利授權(quán)前不予公開，其他的在18個(gè)月之后公開；我國專利法規(guī)定，所有的專利申請(qǐng)自申請(qǐng)日起第18個(gè)月應(yīng)予以公布。因此，通常情況下，如果專利申請(qǐng)人由于客觀條件的限制而對(duì)其發(fā)明創(chuàng)造的“三性”缺乏正確的估價(jià)，那么很有可能因不能通過實(shí)質(zhì)審查而無法獲得專利授權(quán)，但其技術(shù)秘密卻已經(jīng)公開了。然而，如果申請(qǐng)人運(yùn)用國內(nèi)優(yōu)先權(quán)制度，預(yù)先進(jìn)行專利申請(qǐng)而取得申請(qǐng)日，然后，如果申請(qǐng)人能在12個(gè)月內(nèi)通過進(jìn)一步研究完善技術(shù)，達(dá)到專利授予的要求，則申請(qǐng)人可以要求優(yōu)先權(quán)，以避免在此期間別人的公開影響到自己發(fā)明創(chuàng)造的專利性；如果申請(qǐng)人在12個(gè)月內(nèi)沒有達(dá)到這些要求，還可以撤回在先申請(qǐng)，避免對(duì)其技術(shù)的公開。

2．1．2　有利于保護(hù)申請(qǐng)人的利益，鼓勵(lì)創(chuàng)新

何時(shí)提出專利申請(qǐng)最有利一直是人們關(guān)注的問題。過早申請(qǐng)專利，可能會(huì)由于一些技術(shù)問題尚未完全解決，難以通過專利的實(shí)質(zhì)審查；過晚申請(qǐng)專利又擔(dān)心他人占了先機(jī)。本國優(yōu)先權(quán)規(guī)定較好地解決了這一矛盾。申請(qǐng)人可以在成果還不是完全成熟時(shí)先提出申請(qǐng)，達(dá)到盡早保護(hù)自己的發(fā)明構(gòu)思與基本發(fā)明技術(shù)的目的，避免第三人在此期間搶注專利。在保留了一個(gè)較早的申請(qǐng)日之后，發(fā)明者有1年的時(shí)間來完善技術(shù)成果，在此期間還可以籌集實(shí)施該發(fā)明所需要的資金，必要時(shí)甚至還可以將成果市場(chǎng)化，以獲取經(jīng)濟(jì)效益。

2．1．3　有利于促進(jìn)發(fā)明人加快研究進(jìn)程

由于本國優(yōu)先權(quán)的期限是1年，這就在客觀上要求發(fā)明人必須在第一次申請(qǐng)之后的1年內(nèi)完成對(duì)相同主題的發(fā)明創(chuàng)造的完善工作。如果專利申請(qǐng)人既沒有在1年之內(nèi)完成相應(yīng)工作，也沒有采取更改專利保護(hù)方法的措施，那么就很可能因?yàn)楦吖懒税l(fā)明創(chuàng)造的價(jià)值，或者因他人在此期間對(duì)該項(xiàng)技術(shù)的公開行為而導(dǎo)致其無法獲得專利權(quán)。正是在這種制度的激勵(lì)下，發(fā)明者在第一次提出專利申請(qǐng)后，趕在本國優(yōu)先權(quán)期限屆滿前完成技術(shù)完善的工作，從而間接加速發(fā)明創(chuàng)造的進(jìn)程，推動(dòng)科技的發(fā)展。

2．1．4　有利于減輕申請(qǐng)人的負(fù)擔(dān)

中美兩國專利法都規(guī)定專利的修改只能限定在原說明書記載的范圍內(nèi)，在申請(qǐng)之后所作的改進(jìn)與完善，通常只能作為新的申請(qǐng)?zhí)岢觥５豁?xiàng)發(fā)明創(chuàng)造往往會(huì)形成兩項(xiàng)前后關(guān)聯(lián)的專利，即后一專利是前一專利的改進(jìn)專利，而專利權(quán)人則要長(zhǎng)期就同一發(fā)明創(chuàng)造支付兩件專利費(fèi)用。本國優(yōu)先權(quán)允許申請(qǐng)人在1年的期限內(nèi)將相同主題的發(fā)明創(chuàng)造進(jìn)行完善，只發(fā)生一件專利費(fèi)用，而且還允許將若干個(gè)臨時(shí)專利合并為一件正規(guī)專利申請(qǐng)，這在減輕專利權(quán)人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的同時(shí)，也調(diào)動(dòng)了其進(jìn)行創(chuàng)新的積極性。

2．1．5　有利于提高專利申請(qǐng)的質(zhì)量，加強(qiáng)專利保護(hù)

一般來說，首次申請(qǐng)專利時(shí)，就技術(shù)本身而言，發(fā)明者對(duì)成果的認(rèn)識(shí)及其解決技術(shù)問題的方案等都有一定的局限性，背景技術(shù)資料也收集得不夠全面；另一方面，為了趕時(shí)間，在

申請(qǐng)文件的撰寫和保護(hù)范圍及權(quán)利要求的確定上，可能會(huì)考慮不周。而通過要求國內(nèi)優(yōu)先權(quán)，申請(qǐng)人與人能夠有較充足的時(shí)間對(duì)技術(shù)與專利保護(hù)的系列問題，甚至對(duì)市場(chǎng)上可能出現(xiàn)的相關(guān)問題，進(jìn)行較深入的研究分析。在此基礎(chǔ)上對(duì)第一次專利申請(qǐng)作出的修改、補(bǔ)充和完善，無論是從技術(shù)上還是從權(quán)利要求的層面來看，其專利的可靠性與穩(wěn)定性，相對(duì)來講都要好―些，一旦遇到侵權(quán)訴訟，勝訴的把握會(huì)更大一些。這對(duì)于加強(qiáng)專利的保護(hù)都是有利的。

2．2　美國臨時(shí)專利申請(qǐng)的積極意義

2．2．1　申請(qǐng)方式更簡(jiǎn)易、快速

臨時(shí)專利申請(qǐng)可以先提出一個(gè)簡(jiǎn)化的申請(qǐng)，這樣使申請(qǐng)人以較低的初始投資，贏得1年時(shí)間去評(píng)估發(fā)明的商業(yè)潛力。因此它規(guī)定，臨時(shí)專利申請(qǐng)不需撰寫完整的詳細(xì)說明書，不必辦理完整的申請(qǐng)文件，遞交申請(qǐng)時(shí)也只需滿足最低的形式要求。美國專利商標(biāo)局不對(duì)臨時(shí)專利申請(qǐng)的價(jià)值進(jìn)行評(píng)估，審批也比較簡(jiǎn)單，而且其申請(qǐng)費(fèi)用也比正式專利申請(qǐng)少得多。臨時(shí)專利申請(qǐng)只需要支付150美元，而正規(guī)申請(qǐng)申請(qǐng)費(fèi)就是500美元，還不包括律師費(fèi)、各種文書制作費(fèi)用及權(quán)利要求等費(fèi)用。我國《專利法實(shí)施細(xì)則》第三十二條規(guī)定，申請(qǐng)人要求優(yōu)先權(quán)手續(xù)的，應(yīng)當(dāng)在書面聲明中寫明第一次提出專利申請(qǐng)(以下稱在先申請(qǐng))的申請(qǐng)日、申請(qǐng)?zhí)柡褪芾碓撋暾?qǐng)的國家；要求本國優(yōu)先權(quán)的，申請(qǐng)人提交的在先申請(qǐng)文件副本應(yīng)當(dāng)由國務(wù)院專利行政部門制作。相對(duì)而言，我國的在先申請(qǐng)雖然較之于后一次申請(qǐng)的手續(xù)也相對(duì)簡(jiǎn)單，費(fèi)用也相對(duì)低廉，但比起美國臨時(shí)專利申請(qǐng)的規(guī)定來還是復(fù)雜了一些。

2．2．2　專利期限更長(zhǎng)

美國專利法第154條(a)款中規(guī)定，依第119條內(nèi)容規(guī)定的臨時(shí)專利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)不計(jì)人專利權(quán)期限，也就是說1年的未決時(shí)間不包括在20年的專利保護(hù)期限內(nèi)，該期限從正規(guī)專利申請(qǐng)遞交之日起算。因此，臨時(shí)申請(qǐng)給申請(qǐng)人提供了12個(gè)月的專利保護(hù)寬限期，其專利保護(hù)期限實(shí)際是21年。而我國《專利法實(shí)施細(xì)則》規(guī)定，專利法所稱申請(qǐng)日，有優(yōu)先權(quán)的，指優(yōu)先權(quán)日。我國對(duì)專利的20年保護(hù)期是從專利申請(qǐng)日開始計(jì)算的，也即從優(yōu)先權(quán)日算起，因此，專利保護(hù)期限是20年。

3　美國臨時(shí)專利申請(qǐng)對(duì)我們的啟示

3．1　我國制藥企業(yè)應(yīng)積極利用本國優(yōu)先權(quán)制度，強(qiáng)化專利保護(hù)意識(shí)

上文已經(jīng)提到國內(nèi)優(yōu)先權(quán)制度能充分保護(hù)申請(qǐng)人的利益，因此企業(yè)應(yīng)該充分利用這一武器，盡早地為自己的研究成果申請(qǐng)專利保護(hù)，防止苦心研究的成果被別人搶占先機(jī)，“為他人做嫁衣裳”。

此外，我國的本國優(yōu)先權(quán)制度也有較美國的臨時(shí)專利申請(qǐng)制度更為靈活的地方，我國《專利法實(shí)施細(xì)則》第三十三條第二款中規(guī)定，申請(qǐng)人要求本國優(yōu)先權(quán)，在先申請(qǐng)是發(fā)明專利申請(qǐng)的，可以就相同主題提出發(fā)明或者實(shí)用新型專利申請(qǐng)；在先申請(qǐng)是實(shí)用新型專利申請(qǐng)的，可以就相同主題提出實(shí)用新型或者發(fā)明專利申請(qǐng)。發(fā)明專利和實(shí)用新型各有利弊，申請(qǐng)人可以利用本國優(yōu)先權(quán)更加靈活地選擇對(duì)自己更有利的保護(hù)方法[3]。當(dāng)申請(qǐng)人對(duì)其發(fā)明創(chuàng)造所具專利性程度把握不準(zhǔn)確時(shí)，就可以利用此項(xiàng)規(guī)定將其發(fā)明創(chuàng)造先申請(qǐng)實(shí)用新型專利，待技術(shù)成熟后再申請(qǐng)發(fā)明專利；如果申請(qǐng)人先提交了發(fā)明專利申請(qǐng)，卻發(fā)現(xiàn)該技術(shù)可能達(dá)不到發(fā)明專利的水平或者該產(chǎn)品的市場(chǎng)壽命不長(zhǎng)，也可以在12個(gè)月內(nèi)再遞交實(shí)用新型專利申請(qǐng)，而申請(qǐng)日依然是第一次申請(qǐng)的時(shí)間。

3．2　我國制藥企業(yè)應(yīng)關(guān)注國外的專利制度

我國《專利法》第二十條規(guī)定，中國申請(qǐng)人要把在國內(nèi)完成的發(fā)明創(chuàng)造向外國申請(qǐng)專利的，必須首先或同時(shí)向中國專利局申請(qǐng)專利，使得發(fā)明創(chuàng)造可以首先在我國得到利用。而美國專利法第111(b)(7)款規(guī)定申請(qǐng)人不能利用外國申請(qǐng)為他的臨時(shí)申請(qǐng)建立優(yōu)先權(quán)。否則外國申請(qǐng)人享受的是2年的寬限期，而首次提交臨時(shí)專利申請(qǐng)的美國發(fā)明人則只有1年，有違國民待遇原則。因此，目前我國申請(qǐng)人申請(qǐng)外國專利只能通過巴黎公約或PCT途徑。但我們完全可以通過關(guān)注美國的臨時(shí)專利獲取專利信息，把握專利動(dòng)態(tài)，間接受益。

3．2．1　關(guān)注“臨時(shí)專利”，避免侵權(quán)糾紛

企業(yè)在進(jìn)行新藥研發(fā)時(shí)，應(yīng)對(duì)藥品或化合物的專利狀況有所了解，避免侵權(quán)糾紛的發(fā)生。我國《藥品注冊(cè)管理辦法》第十一條也規(guī)定，藥品注冊(cè)的申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)對(duì)其申請(qǐng)注冊(cè)的藥物或者使用的處方、工藝、用途等，提供申請(qǐng)人或者他人在中國的專利及其權(quán)屬狀態(tài)的說明；他人在中國存在專利的，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)提交對(duì)他人的專利不構(gòu)成侵權(quán)的聲明。由于申請(qǐng)“臨時(shí)專利”的諸多優(yōu)點(diǎn)，國外越來越多的企業(yè)或研發(fā)機(jī)構(gòu)在“臨時(shí)專利”申請(qǐng)的比例也越來越高。因此關(guān)注專利狀況不能不關(guān)注“臨時(shí)專利”，一旦發(fā)現(xiàn)本企業(yè)正在研發(fā)的某藥物或化合物已經(jīng)在國外申請(qǐng)了“臨時(shí)專利”，企業(yè)在決策時(shí)就應(yīng)慎重考慮進(jìn)退問題，以免造成不必要的浪費(fèi)。

3．2．2　關(guān)注“臨時(shí)專利”，獲取信息，促進(jìn)仿創(chuàng)結(jié)合

從我國科研機(jī)構(gòu)和制藥企業(yè)的研發(fā)實(shí)力來看，目前要脫離仿制，實(shí)現(xiàn)完全自主創(chuàng)新是有一定困難的，但在仿制過程中產(chǎn)生創(chuàng)新技術(shù)，即“仿創(chuàng)結(jié)合”則是目前國家提倡的道路。實(shí)踐證明，只有在仿制道路上勇于創(chuàng)新的企業(yè)才能在市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中立于不敗之地。企業(yè)通過技術(shù)創(chuàng)新實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)效益突飛猛進(jìn)的例子屢見不鮮。例如天津藥業(yè)在1992年引進(jìn)地塞米松工藝的基礎(chǔ)上，通過1993年和1997年的先后兩次重大技術(shù)突破，使地塞米松系列產(chǎn)品的成本先后降低了30％和40％，迫使跨國公司于1998年完全退出了壟斷10年的中國市場(chǎng)。該企業(yè)的產(chǎn)品已占國內(nèi)市場(chǎng)的80％，亞洲市場(chǎng)的45％[4]。我國企業(yè)可以通過關(guān)注國外的臨時(shí)專利，獲取最新的科研信息，

3．3．3　關(guān)注“臨時(shí)專利”，及時(shí)把握專利動(dòng)態(tài)

臨時(shí)專利于正規(guī)專利之前提出，更具時(shí)效性。關(guān)注臨時(shí)專利，可以及時(shí)把握專利動(dòng)態(tài)，根據(jù)情況變化作出反應(yīng)，以免陷入被動(dòng)。例如2003年4月，當(dāng)非典的陰云剛剛散去的時(shí)候，美國疾病控制與預(yù)防中心就申請(qǐng)了一項(xiàng)涉及非典的臨時(shí)專利。這無疑對(duì)我國是一個(gè)巨大的沖擊，針對(duì)這一情況，中科院上海生命科學(xué)研究院立即啟動(dòng)了防治非典新方法和新藥物的研究工作，上海市知識(shí)產(chǎn)權(quán)局即布置專利檢索人員收集國內(nèi)外與非典相關(guān)的病因病源、抑制治療、藥物研究等方面的專利文獻(xiàn)，不到10天時(shí)間就從“中外專利數(shù)據(jù)庫”中篩選了有關(guān)抗冠狀病毒、病毒抑制、核酸、核酶等方面的上萬篇專利文獻(xiàn)，其中最新的數(shù)據(jù)是2003年4月23日才公開的專利文獻(xiàn)，有效地促進(jìn)了我國在非典領(lǐng)域的研究成果居于世界領(lǐng)先水平。

總之，我國的專利制度要與國際接軌，必然要研究世界各國的專利制度，尤其是國外有所創(chuàng)新的制度，這對(duì)我國專利制度的完善有積極的借鑒意義。本文所述的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)規(guī)定，也希望能對(duì)我國的制藥企業(yè)有所啟示。

參考文獻(xiàn)

1　程毓渡。如何把握知識(shí)產(chǎn)權(quán)與專利授權(quán)[N]．醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào)，2005，9，37．